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豚鼠腫瘤壞死因子α試劑盒使用說明書下載
發布時間： 2016/3/21 點擊次數： 833次提 供 商： 研域（上海）化學試劑有限公司 資料大小： 圖片類型： 下載次數： 98 次 資料類型： DOC 瀏覽次數： 833 次 相關產品： 詳細介紹： 文件下載 TNF-Α試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知TNF-Α濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內進行檢測。先將TNF-Α和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中TNF-Α的濃度呈比例關系。
1、 血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
5、 保存……如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
ELISA試劑盒操作注意事項：
1 ，試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2 ，實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3 ，不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4，使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5 ，使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6，底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8，加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9，按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
豚鼠腫瘤壞死因子α試劑盒操作步驟：
1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
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