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腎上腺皮質(zhì)抗體（ACA）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)需求
發(fā)布時(shí)間： 2015/9/21 點(diǎn)擊次數(shù)： 815次提 供 商： 研域（上海）化學(xué)試劑有限公司 資料大小： 圖片類型： 下載次數(shù)： 124 次 資料類型： DOC 瀏覽次數(shù)： 815 次 相關(guān)產(chǎn)品： 詳細(xì)介紹： 文件下載 腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒需要的器材
（1） 聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標(biāo)板）40孔或96孔，人ELISA試劑盒ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。
（2） 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
（3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。
腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒需要的試劑
（1） 包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）: NaHCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml
（2） 洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸餾水至1000ml
（3） 稀釋液： 牛血清白蛋白（BSA） 0.1克 人ELISA試劑盒加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。
（4） 終止液（2M H2SO4）： 蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。
（5） 底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）: 0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml 0.1M檸檬酸（19.2克/L） 24.3ml 加蒸餾水50ml。
（6） TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液: TMB（10mg/5ml無水乙醇）0.5ml 底物緩沖液（PH5.5） 10ml 0.75%H2O2 32μl
（7） ABTS使用液: ABTS 0.5mg 底物緩沖液（PH5.5） 1ml 3%H2O2 2μl
（8） 抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。
（9） 正常人血清和陽性對(duì)照血清。
腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒的包被：
包被用抗原或抗體的濃度，包被的溫度和時(shí)間，包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定。抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置一夜，37℃中保溫2小時(shí)被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的zui適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化，每批材料需通過實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒的封閉：
封閉（blocking）是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。抗原或抗體包被時(shí)所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙，封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。封閉的手續(xù)與包被相類似。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑，其zui大的特點(diǎn)是價(jià)廉，可以高濃度使用（5%）。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用，但由于奶粉的成份復(fù)雜，而且封閉后的載體不易長期保存，因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用。